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IgG Fab切割酶II（FabCutter II）是一种新型的Fab'切割酶，能对人、鼠、绵羊等物种不同亚型的免疫球蛋白IgGs进行快速单位点酶切。增加酶浓度和延长酶切时间，该酶也可以对小鼠的IgG2a和IgG3进行切割。该酶的酶切位点位于免疫球蛋白IgG铰链区的下方，酶切产物为F(ab')2片段和Fc片段。与木瓜蛋白酶，无花果蛋白酶，胃蛋白酶等相比，FabCutter II具有酶切位点单一，切割快速等优点。

FabCutter II酶切反应：在反应缓冲液（10mM PB,137mM NaCl,2.7mM KCl,pH7.4）中添加一定量的人IgG1和FabCutter II，37℃经过30分钟反应后用15%的SDS-PAGE胶检测酶切效果。
1：Human IgG；
2：Human IgG + FabCutter II；
M：Protein Marker。

组分	1000U	5000U
FabCutter II	1000U	5000U
Human IgG	70μg	70μg

保存：-20℃，溶解后4～8℃可存放一个月。


10mM PB,137mM NaCl,2.7mM KCl pH7.4溶液经0.2μm无菌过滤后冻干。

• 溶解前低速离心，使冻干粉末聚集于管底。
  
• 用无菌ddH₂O溶解，1000U酶加入20μL无菌ddH₂O，5000U酶加入100μL无菌ddH₂O，配制成酶活性为50U/μL的溶液。
  
• 低速离心，使溶液汇聚于管底。

在10mM PB，137mM NaCl,2.7mM KCl，pH7.4的反应体系内，37℃反应30min，一个单位的酶能将1μg的人源IgG切割95%以上。


经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性。


FabCutter II基因克隆自于酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)，通过大肠杆菌表达，通过多步纯化获得。


FabCutter II在生理条件下发挥酶切作用，保持抗体的免疫活
性。在pH范围为6.0～8.0之间都具有酶切活性（见表一），最适酶切温度为37℃，常温下延长酶切时间也可达到同样的酶切效果。
表一：可供选择的反应缓冲液及pH

兼容Buffers	pH
PBS	6.0～8.0
Tris buffer	7.0～8.0
MES Buffer	5.5～6.5
HEPES Buffer	7.0～8.0
Ammonium Bicarbonate Buffer	6.0～7.0
Sodium Acetate Buffer	6.0

注：pH值低于5，会造成酶不可逆失活；pH值高于8.0，需要优化反应条件。

• 按照溶解说明将冻干粉溶解，配制成为50U/μL的溶液。
  
• 待酶切的抗体溶解在反应缓冲液里，建议浓度为0.5～10mg/mL。
  
• 按照1U酶切1μg IgG的量将酶加到反应缓冲液里。
  
• 37℃酶切30min，取部分样品跑SDS-PAGE检测切割效果。
  注：可使用本品中的Human IgG抗体做为底物测试酶切效果，用70μL ddH₂O配制成1mg/mL的蛋白溶解，取50μL加入1μL的酶。酶切前后取样跑SDS-PAGE。

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